Di jehra maran de enzîmên ku girêdanên karboksîl ester hîdrolîz dikin hene.Substratên ji bo hîdrolîzê fosfolîpîd, acetilkolîn û acetate aromatic in.Van enzîman sê celeb hene: phospholipase, acetylcholinesterase û esterase aromatic.Argînîn esteraza di jehra maran de dikare argînîn an lîzînê sentetîk jî hîdrolîz bike, lê ew bi giranî girêdanên peptîdên proteîn ên di xwezayê de hîdrolîz dike, ji ber vê yekê ew girêdayî proteazê ye.Enzîmên ku li vir têne nîqaş kirin tenê li ser substratên esterî tevdigerin û nikarin li ser girêdanek peptîdê tevbigerin.Di nav van enzîman de, fonksiyonên biyolojîk ên acetylcholinesterase û fospholipase girîngtir in û bi tevahî hatine lêkolîn kirin.Hin jehra maran xwedan çalakiya esteraz a aromatîkî ya bihêz in, ku dikare estera p-nîtrofenîl, a - an P-naftalîn acetate û îndole etîl ester hîdrolîz bike.Hîn jî nayê zanîn ka ev çalakî ji hêla enzîmek serbixwe ve tê hilberandin an bandorek alîgir a naskirî ya carboxylesterase, bila ji girîngiya wê ya biyolojîkî were hilberandin.Dema ku jehra Agkistrodon halys Japonicus bi p-nitrophenyl ethyl ester û indole ethyl ester re reaksiyonek hate çêkirin, hîdrolîzên p-nitrophenol û îndol phenol nehatin dîtin;Berevajî vê, ger ev ester bi jehra marên binecureyên kobra Zhoushan û jehra marên Bungarus multicinctus re bertek nîşan bidin, dê zû hîdrolîz bibin.Tê zanîn ku ev jehra kobra xwedan çalakiya cholinesterase ya xurt e, ku dibe ku ji hîdrolîza substratên jorîn berpirsiyar be.Bi rastî, Mclean et al.(1971) ragihand ku gelek jehrên maran ên ji malbata Kobra dikarin estera îndol, etîl estera naftalîn û estera butîl naftalîn hîdrolîz bikin.Ev jehra mar ji: kobra, kobra stûyê reş, kobra lêv reş, kobra zêr, kobraya misrî, kobra padîşah, mamba kobra zêrîn, mamba reş û mamba lêv spî (D. aw hîn jî marê rombola rojhilatî dizane
Jehra mar dikare etîl estera methyl indole hîdrolîz bike, ku substrate ye ji bo diyarkirina çalakiya kolinesterase di serumê de, lê ev jehra mar çalakiya kolinesterase nîşan nade.Ev nîşan dide ku di jehra kobra de esterazek nenas heye, ku ji cholinesterase cuda ye.Ji bo têgihîştina cewhera vê enzîmê, xebata veqetandinê bêtir hewce ye.
1, Fospholipase A2
(I) Serpêhatî
Fospholipase enzîmek e ku dikare glyceryl fosphate hîdrolîz bike.Di xwezayê de 5 cureyên fosfolîpazê hene, bi navê fosfolîpaza A2 û fosfolîpaza.
A., fospholipase B, fospholipase C û fospholipase D. Jehra maran bi giranî fospholipase A2 (PLA2) heye, çend jehra maran fospholipase B heye, û fosfolîpazên din bi giranî di tevnên heywanan û bakteriyan de têne dîtin.Xiflteya 3-11-4 cihê çalakiya van fosfolîpazan li ser hîdrolîza substratê nîşan dide.
Di nav fospholipases de, PLA2 bêtir lêkolîn kirin.Dibe ku di jehra maran de enzîma herî lêkolînkirî be.Substrata wê girêdana esterî ya li ser pozîsyona duyemîn a Sn-3-glycerophosphate ye.Ev enzîm bi berfirehî di jehra mar, jehra hingiv, jehra dûpişk û tevnên heywanan de tê dîtin û PLA2 di jehra marên çar malbatan de pir e.Ji ber ku ev enzîm xaneyên sor ên xwînê dişkîne û dibe sedema hemolîzê, jê re "hemolîzîn" jî tê gotin.Hin kes jî PLA2 lecithinase hemolîtîk jî dibêjin.
Ludeeke pêşî dît ku jehra maran dikare bi riya enzîman li ser lecithin tevbigere, pêkhateyek hemolîtîk çêbike.Piştre, Delezenne et al.îspat kir ku dema jehra kobra li ser serum an zerika hespan tevdigere, ew maddeyek hemolîtîk çêdike.Naha tê zanîn ku PLA2 rasterast dikare li ser fosfolîpîdên parzûna erythrocyte tevbigere, avahiya parzûna erythrocyte hilweşîne û rasterast hemolîzê bike;Di heman demê de ew dikare li ser serum an lecithin-a lêzêdekirî tevbigere da ku lecithin hemolîtîk hilberîne, ku li ser hucreyên xwînê yên sor tevdigere da ku hemoliza nerasterast çêbike.Tevî ku PLA2 di çar malbatên jehra maran de pir e, naveroka enzîman di jehra maran de hinekî cûda ye.Marê çilmisî (C
Jehra mar tenê çalakiya PLA2 ya qels nîşan da.Tabloya 3-11-11 berawirdkirina çalakiya PLA2 ya 10 jehra sereke yên marên jehrî li Çînê nîşan dide.
Tablo 3-11-11 Berawirdkirina çalakiyên fosfolîpaza VIII yên 10 jehra maran li Çînê
Jehra maran
berdana qelew
Alîfatîk acid,
Cjumol/mg)
Çalakiya hemolîtîk CHU50/^ g * ml)
Jehra maran
Asîdên rûnê berdan
(^raol/mg)
Çalakiya hemolîtîk "(HU50 / ftg * 1111)
Najanaja atra
9. 62
yanzdeh
Micracephal ophis
pênc xal yek sifir
kalyspallas
8. 68
du hezar û heştsed
gracilis
V, acutus
7. 56
* * #
Ophiophagus hannah
sê xal heşt du
sed û çil
Bnugarus fasctatus
7,56
dused û heştê
B. multicinctus
yek xal neh şeş
dused û heştê
Viper a russelli
heft xal sifir sê
T, mucrosquamatus
yek xal heşt pênc
Siamensis
T. stejnegeri
0. 97
(2) Veqetandin û paqijkirin
Naveroka PLA2 di jehra maran de mezin e, û ew ji germ, asîd, alkali û denaturant re stabîl e, lewra paqijkirin û veqetandina PLA2 hêsan e.Rêbaza hevpar ev e ku meriv pêşî li ser jehra xav filtrasyona gêlê pêk bîne, dûv re kromatografiya pevguhertina îyonê pêk bîne, û gava din dikare were dubare kirin.Pêdivî ye ku were zanîn ku zuwakirina cemidî ya PLA2 piştî kromatografiya veguheztina îyonê divê nebe sedema kombûnê, ji ber ku pêvajoya zuhakirina cemidî bi gelemperî hêza îyonî di pergalê de zêde dike, ku ev faktorek girîng e ku dibe sedema kombûna PLA2.Ji bilî rêbazên gelemperî yên jorîn, rêbazên jêrîn jî hatine pejirandin: ① Wells et al.② Analoga substratê ya PLA2 wekî lîgand ji bo kromatografiya têkildar hate bikar anîn.Ev lîgand dikare bi Ca2+ ve bi PLA2-a jehra maran ve girêbide.EDTA bi piranî wekî eluent tê bikar anîn.Piştî ku Ca2 + tê rakirin, têkiliya di navbera PLA2 û lîgandê de kêm dibe, û ew dikare ji lîgandê were veqetandin.Yên din 30% çareseriya organîk an 6mol/L urea wekî eluent bikar tînin.③ Kromatografiya hîdrofobîk bi PheiiylSephar0SeCL-4B hate kirin da ku şopa PLA2 di kardiotoksîn de were rakirin.④ Antîpoşa dijî PLA2 wekî lîgand hate bikar anîn da ku li ser PLA2 kromatografiya têkildariyê pêk bîne.
Heya nuha, hejmareke mezin ji jehra maran PLAZ hatine paqij kirin.Tu et al.(1977) navnîşa PLA2 ya ku berî sala 1975-an ji jehra maran hatiye paqijkirin. Di van salên dawî de, her sal hejmareke mezin ji gotarên li ser veqetandin û paqijkirina PLA2 hatine ragihandin.Li vir, em balê dikişînin ser veqetandin û paqijkirina PLA ji hêla zanyarên Chineseînî.
Chen Yuancong et al.(1981) sê cureyên PLA2 ji jehra Agkistrodon halys Pallas li Zhejiang veqetandin, ku dikarin li gorî xalên xwe yên îzoelektrîkî li PLA2-a asîdî, bêalî û alkalîn werin dabeş kirin.Li gorî jehrbûna wê, PLA2 ya bêalî jehrîntir e, ku wekî neurotoksîna presynaptîk Agkistrodotoxin hatiye nasîn.Alkaline PLA2 kêmtir jehr e, û PLA2 asîdî hema hema tu jehrî tune.Wu Xiangfu et al.(1984) taybetmendiyên sê PLA2s, di nav de giraniya molekulî, pêkhatina asîda amînî, N-termînalê, xala isoelektrîkî, aramiya termal, çalakiya enzîmê, jehrîn û çalakiya hemolîtîk berhev kirin.Encaman destnîşan kir ku wan xwedî giraniya molekulî û aramiya germî ya wekhev in, lê di aliyên din de cûdahiyên girîng hene.Di warê çalakiya enzîmê de, çalakiya enzîma asîdê ji çalakiya enzîma alkaline bilindtir bû;Bandora hemolîtîk a enzîma alkalînê li ser şaneyên xwîna sor ên mişkê herî xurt bû, li dûv wê enzîma bêalî bû, û enzîma asîdê bi dijwarî hemolîze bû.Ji ber vê yekê, tê texmîn kirin ku bandora hemolîtîk a PLAZ bi barkirina molekula PLA2 ve girêdayî ye.Zhang Jingkang et al.(1981) krîstalên Agkistrodotoxin çêkirine.Tu Guangliang et al.(1983) ragihand ku PLAyek jehrî ya bi xala isoelektrîkî 7.6 ji jehra Vipera rotundus ji Fujian, û taybetmendiyên wê yên laşî û kîmyayî, pêkhateya asîda amînî û rêza 22 bermayiyên asîdên amînî li N hate veqetandin û paqij kirin. - termînal hatin diyarkirin.Li Yuesheng et al.(1985) PLA2 din ji jehra Viper rotundus li Fujian veqetand û paqij kir.Yekîneya PLA2 * 13 800 e, xala isoelektrîkê 10,4 e, û çalakiya taybetî 35/xnioI/miri mg e. Bi lesîtîn wekî substratê, pHya herî baş a enzîmê 8,0 e û germahiya çêtirîn 65 ° C ye. LD5 di mişkan de bi intravenoz tê derzîkirin.Ew 0,5 ± 0,12 mg / kg e.Ev enzîm xwedî bandorên antîkoagulant û hemolîtîk eşkere ye.Molekula jehrîn a PLA2 ji 123 bermayiyên 18 cureyên asîdên amînî pêk tê.Molekul bi cysteine (14), aspartic acid (14) û glycine (12) dewlemend e, lê tenê yek methionine heye, û N-termînala wê bermayiya serine ye.Li gorî PLA2-a ku ji hêla Tuguang ve hatî veqetandin, giraniya molekular û hejmara bermahiyên asîda amînî ya her du îzoenzîman pir dişibin hev, û pêkhateya asîda amînî jî pir dişibin hev, lê hêjmara bermahiyên aspartîk û prolîn hinekî cûda ye.Jehra marê kobrayê qralê Guangxi PLA2-ya dewlemend dihewîne.Shu Yuyan et al.(1989) PLA2 ji jehrê veqetand, ku xwedan çalakiyek taybetî 3,6 qat ji jehra orjînal, giraniya molekulî ya 13000, pêkhateyek ji 122 bermahiyên asîda amînî, xalek îsoelektrîkî 8,9, û aramiya germî ya baş heye.Ji çavdêriya mîkroskopa elektronîkî ya bandora PLA2 ya bingehîn li ser hucreyên xwînê yên sor, tê dîtin ku ew bandorek eşkere li ser parzûna hucreya xwîna sor a mirovî heye, lê bandorek eşkere li ser hucreyên xwîna sor ên bizinê tune.Ev PLA2 li ser leza elektroforez a hucreyên xwînê yên sor di mirov, bizin, kevroşk û berazên guinea de bandorek paşveçûnek eşkere heye.Chen et al.Ev enzîm dikare kombûna trombêlan a ku ji hêla ADP, kolajen û sodyûm arachidonic acid ve hatî çêkirin asteng bike.Dema ku giraniya PLA2 10/xg/ml~lOOjug/ml be, kombûna trombocitan bi tevahî tê asteng kirin.Ger trombolên şûştî wekî materyal werin bikar anîn, PLA2 nikare kombûna di giraniya 20Mg/ml de asteng bike.Aspirin astengkerek cyclooxygenase ye, ku dikare bandora PLA2 li ser trombêlan asteng bike.PLA2 dibe ku bi hîdrolîzkirina asîda arachidonic ji bo sentezkirina tromboxane A2 berhevbûna trombocitan asteng bike.Pêkhatina çareseriyê ya PLA2 ku ji hêla jehra Agkistrodon halys Pallas ve li parêzgeha Zhejiang ve hatî hilberandin bi navgîniya dichroism, fluorescence û vegirtina UV-ê hate lêkolîn kirin.Encamên ceribandinê destnîşan kirin ku konformasyona zincîra sereke ya vê enzîmê dişibihe ya heman cûreyê enzîmê ji celeb û nifşên din, pêkhatina îskelet xwedan berxwedana germê ya baş bû, û guherîna strukturî ya di hawîrdora asîdê de vegerî bû.Têkiliya çalakger Ca2 + û enzîmê bandorê li hawîrdora bermahiyên trîptofanê nake, lê astengker Zn2 + berevajî vê yekê dike.Awayê ku nirxa pH ya çareseriyê bandorê li çalakiya enzîmê dike ji reagentên jorîn cuda ye.
Di pêvajoya paqijkirina PLA2 ya jehra maran de, diyardeyek eşkere ev e ku jehra mar du an zêdetir lûtkeyên elusyona PLA2 dihewîne.Ev diyarde wiha dikare were ravekirin: ① ji ber hebûna îzozîman;② Cûreyek PLA2 di nav cûrbecûr tevliheviyên PLA2 yên bi giraniyên molekulî yên cihêreng, ku piraniya wan di navbera 9 000 ~ 40 000 de ne, tê polîmerîze kirin;③ Kombûna PLA2 û pêkhateyên din ên jehra maran PLA2 tevlihev dike;④ Ji ber ku girêdana amîdê ya di PLA2 de hîdrolîz e, bar diguhere.① Û ② hevpar in, bi tenê çend îstîsnayan, wek PLA2 di CrWa/w jehra mar de
Du rewş hene: ① û ②.Rewşa sêyem di PLA2 de di jehra marên jêrîn de hatiye dîtin: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, marê Palestînî, marê qûmê, û marê gemarî km.
Encama doza ④ dihêle ku leza koçkirina PLA2 di dema elektroforezê de biguhezîne, lê pêkhateya asîda amînî naguhere.Peptîd dikarin bi hîdrolîzê werin şikandin, lê bi gelemperî ew hîn jî bi bendên dîsulfîdê bi hev ve têne girêdan.Jehra marê çilmisê ya rojhilatî du formên PLA2-ê dihewîne, ku bi rêzê jê re tîpa a û tîpa p PLA2 tê gotin.Cûdahiya van her du celebên PLA2 tenê asîdek amînî ye, ango di molekulek PLA2 de glutamine di molekulek din a PLA2 de bi glutamic asîd tê guheztin.Her çend sedema rastîn a vê cûdahiyê ne diyar e, bi gelemperî tê bawer kirin ku ew bi hilweşandina PLA2 ve girêdayî ye.Ger PLA2 di jehra marqeya Filistînî de bi jehra xav re germ were girtin, dê komên dawî yên di molekulên enzîma wê de ji berê zêdetir bibin.Ji C PLA2-ya ku ji jehra maran veqetandî du termînalên N-yê yên cuda hene, û giraniya wê ya molekulî 30000 e. Dibe ku ev diyarde ji hêla dimera asîmetrîk a PLA2-yê ve çêbibe, ku dişibe dimera sîmetrîk a ku ji hêla PLA2-ê ve di jehra marê gurçikê yê almasê yê rojhilatî de pêk tê. û marê ziravî yê almasî yê rojavayî.Kobraya Asyayê ji gelek binecins pêk tê, ku hin ji wan di dabeşkirinê de ne pir diyar in.Ji bo nimûne, ya ku berê jê re digotin binecureyên Deryaya Xezerê ya Kobra, niha tê naskirin
Pêdivî ye ku ew ji Kobraya Deryaya Xezerê ya Derve re were hesibandin.Ji ber ku gelek binecure hene û ew bi hev re hatine tevlihevkirin, pêkhatina jehra maran ji ber çavkaniyên cihêreng pir diguhere û naveroka îzozimên PLA2 jî zêde ye.Mînak jehra kobra
Bi kêmanî 9 cureyên îzozimên PLA2 yên cureyên r ^ ll, û 7 cureyên îzozîmên PLA2 jî di jehra binecureyên kobra yên Xezerê de hatin dîtin.Durkin et al.(1981) li ser naveroka PLA2 û hejmara îzozîmên di jehra marên cuda de lêkolîn kir, di nav de 18 jehra kobra, 3 jehra mamba, 5 jehra maran, 16 jehra marên gewr û 3 jehra marên deryayê.Bi gelemperî, çalakiya PLA2 ya jehra kobra bilind e, bi gelek îzozîm.Çalakiya PLA2 û îzozimên jehra marê navîn in.Çalakiya PLA2 ya jehra mamba û jehra marê çilmisî pir kêm e an jî çalakiya PLA2 tune.Çalakiya PLA2 ya jehra marên deryayê jî kêm e.
Di van salên dawî de, nehatiye ragihandin ku PLA2 di jehra maran de di forma dimerek çalak de heye, wek marê rombofora rojhilatî (C. jehra mar di nav xwe de tîpa a û tîpa P PLA2 heye, ku her du jî ji du yekîneyên wekhev pêk tên. , û tenê dimerase heye
Çalakî.Shen et al.her weha pêşniyar kir ku tenê dimera PLA2 ya jehra maran forma çalak a enzîmê ye.Lêkolîna strukturên mekan jî îsbat dike ku PLA2 ya marê ziravî yê almasê yê rojavayî di forma dimer de heye.Têkelê Piscivorous
Du PLA ^ Ei û E2 yên cuda yên jehra maran hene, ku tê de 仏 di forma dimer de heye, dimer çalak e, û monomera wê ya veqetandî neçalak e.Lu Yinghua et al.(1980) bêtir taybetmendiyên fîzîkî û kîmyewî û kînetîkên reaksiyonê yên E. Jayanthi et al.(1989) PLA2-ya bingehîn (VRVPL-V) ji jehra marê veqetand.Giraniya molekulê ya monomer PLA2 10000 e, ku xwedî bandorên kujer, antîkoagulant û edema ye.Enzîm dikare di bin şerta PH 4.8 de polîmerên bi giraniya molekulên cihêreng polîmerîze bike, û asta polîmerîzasyonê û giraniya molekulê ya polîmeran bi zêdebûna germahiyê re zêde dibe.Giraniya molekulê ya polîmera ku di 96 ° C de hatî çêkirin 53 100 e, û çalakiya PLA2 ya vê polîmerê bi du zêde dibe
Dema şandinê: Nov-18-2022